慢病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡

作     者：刘厚广 刘卓 姜颖 肖井仁 李红影 李峥 霍姗姗 于英君 

作者机构：福建中医药大学附属厦门市第三医院皮肤科福建厦门361100 吉林大学中日联谊医院普通外科 黑龙江中医药大学生化教研室 

基　　金：厦门市卫生局资助项目(No.3502Z20130190) 厦门市同安区科技局资助项目(No.20120081) 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2015年第35卷第22期

页      码：6345-6347,6473页

摘      要：目的探讨慢病毒介导的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2-shRNA对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响。方法依据CDK2基因序列,设计3条靶向干扰CDK2的序列,构建CDK2-shRNA慢病毒载体,质粒转染人胚肾细胞株(HEK293)细胞进行慢病毒包装,滴度测定包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,免疫印迹检测对CDK2的干扰效率及对细胞周期蛋白(cyclin)E、E2F1、RB蛋白表达的影响,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测A375凋亡的发生。结果成功获得包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,病毒滴度为5×108TU/ml。重组的p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒能有效下调CDK2、cyclin E、E2F1蛋白表达,抑制A375细胞增殖和触发凋亡。结论基于慢病毒介导的CDK2-shRNA能够促进黑色素瘤细胞A375凋亡发生,为黑色素瘤的基因治疗提供理论支撑。

主 题 词：黑色素瘤 细胞周期蛋白依赖性激酶 慢病毒载体 凋亡 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.012

馆 藏 号：203644608...