GM-CSF基因腺病毒表达载体的构建及其在树突状细胞的表达

作     者：朱雄鹏 陈志哲 林旭 胡建达 李纯团 许贞书 杨婷 Zhu Xiongpeng;Chen Zhizhe;Lin Xu;Hu Jianda;Li Chuntuan;Xu Zhenshu;Yang Ting

作者机构：福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001 福建医科大学分子医学研究中心福州350004 福建医科大学附属泉州市第一医院血液科泉州362000 

出 版 物：《福建医科大学学报》 (Journal of Fujian Medical University)

年 卷 期：2006年第40卷第5期

页      码：431-435页

摘      要：目的构建人GM-CSF基因的重组腺病毒载体,探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。方法设计一对GM-CSF基因上下游引物,以质粒pBlu-hGM-CSF为模板,经PCR扩增获得GM-CSF基因全部序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pshuttle-CMV-GM-CSF。经双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,将2种重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,并感染人树突状细胞。结果完成构建含有人GM-CSF基因的重组腺病毒,病毒滴度Ad-GM-CSF 5.2×109pfu/mL。RT-PCR及ELISA检测证实GM-CSF在DC中表达。结论构建重组腺病毒载体,并在DC表达GM-CSF抗原蛋白。

主 题 词：腺病毒科,载体 遗传 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 树突细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-4194.2006.05.004

馆 藏 号：203648307...