小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：田康乐 李刚 邱文英 程朝飞 TIAN Kang-le;LI Gang;QIU Wen-ying;CHENG Chao-fei

作者机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室北京100193 

基　　金：国家高新技术研究发展计划(863计划)(2008AA10Z411) "十一五"国家科技支撑计划(2006BAD06A13-4) "948"项目(2007-G57-C) FAO/IAEA项目(14515-0 R1) 国家公益行业项目(200903037-2) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2012年第25卷第9期

页      码：1185-1189页

摘      要：目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体。方法根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测。结果重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1∶64 000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。结论原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础。

主 题 词：小反刍兽疫病毒 F蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 090601[090601] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 100102[100102] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2012.09.106.tianky.001

馆 藏 号：203649812...