GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用

作     者：王海萍 王法财 沈玉先 Wang Haiping;Wang Facai;Shen Yuxian

作者机构：安徽医科大学省部共建重要遗传疾病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽医科大学生物药物研究所合肥230032 安徽医科大学神经生物学教研室合肥230032 

基　　金：国家自然科学基金(编号:30572219) 安徽省自然科学基金(编号:090413094) 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2010年第45卷第6期

页      码：733-736页

摘      要：目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响。结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡。结论成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性。

主 题 词：α1抗胰蛋白酶缺乏症/遗传学 突变基因表达 转染 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 071007[071007] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-1492.2010.06.002

馆 藏 号：203650405...