环介导同温扩增检测全血日本血吸虫DNA的研究

作     者：王岑 余传信 季旻珺 宋丽君 殷旭仁 钱春艳 王玠 吴观陵 

作者机构：南京医科大学病原生物学系江苏南京210029 卫生部重要寄生虫病预防与控制高技术重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064 

基　　金：国家“十一·五”科技重大专项项目(No.2008ZX10004-011) 江苏省卫生厅科技项目(No.H200738) 江苏省科技厅公益专项基金项目(No.BM2007704) 江苏省医学重点人才基金项目(No.RC2007095) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2010年第5卷第10期

页      码：749-753页

摘      要：目的建立一种检测全血标本中日本血吸虫DNA的环介导同温扩增（LAMP）方法。方法选择日本血吸虫基因组重复序列DNA SjR2（839～1 138 bp、563～764 bp）、SjSH7（204～399 bp）和Sj-nonLTR1（1 678～1 877 bp）的4段DNA序列作为扩增片段,根据LAMP原理设计合成4组引物,通过对此4组引物用于DNA LAMP扩增的敏感性和特异性进行比较分析和检测条件的优化,建立特异、敏感,可用于检测全血日本血吸虫DNA的LAMP方法。应用此方法对10只日本血吸虫感染前及感染后不同时间同一家兔的配对全血DNA进行扩增,观察其应用价值。结果 4组引物中,以日本血吸虫SjR2（839～1 138 bp）作为扩增靶片段,可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株（检出限为10-4ngDNA）、菲律宾株和曼氏血吸虫的基因组DNA,人全血基因组DNA、华支睾吸虫基因组DNA、疟原虫基因组DNA不能扩增。以Sj-nonLTR1（1 678～1 877 bp）为靶片段,LAMP扩增无特异性。以SjR2（563～764 bp）和SjSH7（204～399bp）为靶片段,可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株基因组DNA（检出限为10-6ng和10-3ng）及菲律宾株基因组DNA,人全血基因组DNA、华支睾吸虫基因组DNA、曼氏血吸虫基因组DNA和疟原虫基因组DNA不能扩增。用SjR2（839～1 138 bp）引物对10只日本血吸虫感染兔不同时间的配对全血标本进行扩增,感染前血样均为阴性,感染后连续5周全血基因组DNA的浓缩标本均为阳性,非浓缩标本部分阳性。结论本研究建立了检测兔全血日本血吸虫兔基因组DNA的LAMP方法。该方法对浓缩DNA标本的检出效率高于非浓缩标本,具有血吸虫感染早期诊断价值。

主 题 词：血吸虫,日本 全血基因组 环介导同温扩增 诊断 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.2010.10.018

馆 藏 号：203650767...