人BDNF重组逆转录病毒载体的构建

作     者：阳运康 林月秋 汤逊 蔡培强 

作者机构：成都军区昆明总医院骨科 

基　　金：云南省自然科学基金资助项目(2002C0070M) 

出 版 物：《中国骨肿瘤骨病》 (Chinse Journal Of Bone Tumor And Bone Disease)

年 卷 期：2005年第4卷第4期

页      码：224-227页

摘      要：目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T—BDNF克隆,对该克隆进行限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP—BDNF真核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,PCR与测序鉴定。结果PLEGFP—BDNF重组逆转录病毒构建成功。结论hBDNF在大肠杆菌中的成功表达在转基因治疗CNS病变方面具有潜在应用价值。

主 题 词：hBDNF 基因克隆 重组逆转录病毒载体 质粒 BDNF基因 真核表达重组质粒 限制性酶切分析 全长编码序列 大肠杆菌菌株 真核表达载体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-252X.2005.04.012

馆 藏 号：203655124...