海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

作     者：谷跃峰 丛丽娜 骆宁 GU Yue-feng;CONG Li-na;LUO Ning

作者机构：大连工业大学生物与食品工程学院辽宁大连116034 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31072224) 辽宁省教育厅创新团队项目(LT2010012) 大连市科技计划项目(2009J31SC034) 

出 版 物：《大连工业大学学报》 (Journal of Dalian Polytechnic University)

年 卷 期：2010年第29卷第5期

页      码：317-320页

摘      要：研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession ***036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。

主 题 词：海参溶菌酶 毕赤酵母 表达 纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0832[0832] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 083204[083204] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-1404.2010.05.002

馆 藏 号：203656918...