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食品中腰果过敏原成分PCR检测方法建立

食品中腰果过敏原成分PCR检测方法建立

作     者:袁飞 暴书婵 杨海荣 赵勇胜 吴亚君 王斌 邓婷婷 黄文胜 赵贵明 陈颖 

作者机构:中国检验检疫科学研究院食品安全研究所北京100123 

基  金:科技部"十一五"支撑项目(2009BADB9B03) 质检公益性行业科研专项(10-46) 

出 版 物:《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期:2011年第27卷第5期

页      码:544-546页

摘      要:目的建立食品中腰果过敏原成分的PCR检测方法。方法采用溴化十六烷三甲基胺(CTAB)法和磁珠法提取的坚果DNA,根据GenBank中腰果3种主要致敏蛋白AnaO1、AnaO2、AnaO3的基因序列,设计9对引物;通过扩增效果和特异性,筛选腰果最佳扩增引物对;采用腰果特异性引物对AnaO3 F3R3和植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果成分进行双重PCR扩增,确定方法特异性;通过腰果DNA梯度稀释确定该检测方法灵敏度;通过样品添加试验模拟食品中腰果过敏原成分的检测。结果采用CTAB法提取坚果DNA的A260/A280比值普遍1.8,说明去除蛋白质较干净;9对引物中,引物对AnaO3 F3R3特异性最好,其最佳退火温度为55.4℃;采用该引物与植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果DNA进行双重PCR,只有腰果样品能扩增出312 bp的特异性条带;采用该PCR法检测腰果过敏原成分的灵敏度为0.1 pg/μL;可以检出食品中>0.001%的腰果成分。结论建立了一种食品中腰果过敏原成分的双重PCR检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,与其他12种坚果不存在交叉反应。

主 题 词:腰果过敏原 PCR 检测 致敏蛋白AnaO 

学科分类:1004[医学-公共卫生预防医学类] 100403[100403] 10[医学] 

馆 藏 号:203657159...

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