猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用

作     者：董沁芳 郭瑶 汪平 程菊会 徐辉 丁先锋 郭江峰 姜永厚 Dong Qinfang;Guo Yao;Wang Ping;Cheng Juhui;Xu Hui;Ding Xianfeng;Guo Jiangfeng;Jiang Yonghou

作者机构：浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省动物疫病预防控制中心杭州310020 

基　　金：浙江省科技计划项目(2008C22081) 浙江省自然科学基金项目(Y3090166) 浙江省科技攻关重点项目(2005C22032) 浙江省生物医学重中之重学科开放基金项目(SWYX0908) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2012年第28卷第2期

页      码：165-169页

摘      要：为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。

主 题 词：LDR-PCR 猪细小病毒 条件优化 检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2012.02.011

馆 藏 号：203657653...