Jmjd3基因RNAi慢病毒载体构建及转染BMSCs效应的实验研究

作     者：张平 傅瑜 江宏兵 陶震江 ZHANG Ping;FU Yu;JIANG Hong-bing;TAO Zhen-jiang

作者机构：南京医科大学口腔医学院口腔颌面外科南京210029 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81070810) 

出 版 物：《口腔医学》 (Stomatology)

年 卷 期：2012年第32卷第4期

页      码：196-199页

摘      要：目的构建针对SD大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒载体,转染大鼠骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)后观察其对Jmjd3基因的抑制作用并筛选最有效干扰序列。方法设计4对Jmjd3基因shRNA寡核苷酸序列,插入pGCSIL-GFP载体形成重组载体。重组载体经过测序鉴定后转染293T细胞生产病毒液,病毒液转染大鼠BMSCs,Western blot分析转染前后Jmjd3表达情况。通过计算Jmjd3灰度值/ACTIN灰度值,筛选出最有效的干扰序列。结果测序结果证实Jmjd3基因shRNA寡核苷酸序列正确插入载体中,成功构建4个大鼠Jmjd3基因RNAi表达载体。Western blot检测显示转染后Jmjd3蛋白表达显著下调,半定量分析显示相对于未转染组,shRNA-1组、shRNA-2组、shRNA-3组、shRNA-4组分别下调79.5%(P0.05),shRNA-2组为最佳干扰序列。结论针对大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒载体构建成功,并能有效抑制BMSCs中Jmjd3基因的表达。

主 题 词：Jmjd3 RNA干扰 表观遗传修饰 组蛋白去甲基化酶 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.13591/j.cnki.kqyx.2012.04.001

馆 藏 号：203657731...