贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立与条件优化

作     者：冯俊姣 何苗 联想 

作者机构：陕西师范大学生命科学学院陕西西安710062 陕西师范大学药用资源与天然药物化学教育部重点实验室陕西西安710062 西北濒危药材资源开发国家工程实验室陕西西安710062 

基　　金：国家基础科学人才培养基金项目(J1103511) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2012年第40卷第36期

页      码：17525-17527页

摘      要：[目的]建立贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系,并对其条件进行优化。[方法]以贯叶连翘基因组DNA为模板,用L16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和模板DNA浓度5种因素对贯叶连翘ISSR-PCR反应扩增结果的影响。[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:20μl ISSR-PCR反应体系中含10×PCR buffer,Mg2+浓度1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度50 U/ml,DNA浓度20 ng/μl,dNTP浓度250μmol/L,引物浓度0.75μmol/L。[结论]试验建立的贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠。

主 题 词：贯叶连翘(Hypericum perforatum Linn.) ISSR-PCR 正交优化 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2012.36.030

馆 藏 号：203658042...