NgR特异性siRNA筛选及其慢病毒表达载体构建

作     者：刘百峰 王晓芳 徐行 李春龙 吕碧涛 

作者机构：大庆市人民医院骨科163311 第二军医大学上海长征医院骨科 

基　　金：黑龙江省卫生厅课题(2012-740) 

出 版 物：《中国伤残医学》 (Chinese Journal of Trauma and Disability Medicine)

年 卷 期：2013年第21卷第7期

页      码：99-101页

摘      要：目的:筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其慢病毒表达载体。方法:按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;将获得的高沉默效率siRNA克隆入慢病毒质粒pRNAT—U6.2/Lenti(SD1259),构建NgR特异性siRNA慢病毒表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果:在4对siRNA中筛选出高沉默效率的NgR特异性siRNA199序列,将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siRNA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论:NgR特异性siRNA199及其慢病毒表达载体构建成功,为进一步观察NgR特异性慢病毒载体RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达的神经元细胞实验奠定了基础。

主 题 词：Nogo受体 RNA干扰 脊髓损伤 慢病毒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-6567.2013.07.061

馆 藏 号：203658261...