小鼠MIA3基因3＇-UTR区荧光素酶报告载体的构建及鉴定

作     者：瓦庆德 何沛恒 代学俊 邹峰 周治宇 邹学农 徐栋梁 Wa Qingde;He Peiheng;Dai Xuejun;Zou Feng;Zhou Zhiyu;Zou Xuenong;Xu Dongliang

作者机构：中山大学附属第一医院骨科广州510080 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(“973”计划项目)(2012CB619105) 

出 版 物：《中华显微外科杂志》 (Chinese Journal of Microsurgery)

年 卷 期：2014年第37卷第6期

页      码：573-577页

摘      要：目的 建立靶向miR-374b的MIA3 psicheck2野生型及突变型载体,为双荧光素酶报告实验提供前期保障. 方法 构建MIA3 psicheck2野生型及突变型载体,首先根据小鼠MIA3-3 ＆#39;UTR序列信息设计其扩增引物,以小鼠血液全血基因组DNA为模板PCR扩增MIA3-3 ＆#39;UTR序列,并将其克隆至psicheck2双荧光素酶报告载体中.然后,设计突变引物将miR-374b种子序列靶标TATTATA突变成AAATTAT构建突变载体.其次,采用载体酶切鉴定及测序法对构建的载体进行鉴定. 结果 琼脂糖电泳分析,载体PCR扩增大小与理论大小相符合.DNA测序鉴定MIA3-3 ＆#39;UTR-WT载体构建成功.突变型载体的构建,成功将miR-374b种子序列靶标TATTATA突变成AAATTAT. 结论 载体的成功构建,为进一步鉴定miR-374b与成软骨分化相关靶基因MIA3是否真正具有结合位点奠定了基础.

主 题 词：黑色素瘤活性抑制蛋白 微小RNA 3’端非翻译区 荧光素酶报告载体 软骨分化 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-2036.2014.06.014

馆 藏 号：203659037...