凋亡抑制基因survivin表达载体的构建及其在HepG2中的表达

作     者：成胜权 王文亮 晏伟 

作者机构：第四军医大学西京医院病理科陕西西安710033 第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2004年第25卷第5期

页      码：452-455页

摘      要：目的 :克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin(SVV)的编码序列 ,构建含SVV基因的真核细胞表达载体并在肝癌细胞系HepG2中表达 ,为进一步研究该基因在肝癌发病中的作用奠定基础 .方法 :根据已发表的SVV基因的核苷酸序列设计并合成一对引物 ,以HL 6 0细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增产物用BamHI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体 pcDNA3.0中 ,用限制性内切酶酶切重组质粒 pcDNA3.0 SVV和DNA序列测定进行鉴定 .用脂质体法将 pcDNA3.0 SVV导入肝癌细胞系HepG2中 ,G4 1 8选择培养 ,经免疫组化法和RT PCR鉴定其表达 .结果 :RT PCR扩增出长 4 4 5bp的特异性片段 ,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实 ,并测序表明序列与GenBank报道完全一致 .pcDNA3.0 SVV在HepG2细胞中有稳定表达 .结论 :成功克隆了SVV的编码序列 ,构建了其真核细胞表达载体 pcDNA3.0 SVV 。

主 题 词：Survivin基因 基因克隆 真核表达载体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-2790.2004.05.021

馆 藏 号：203660093...