检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

作     者：郭紫晶 何琪富 汤承 张斌 岳华 GUO Zijing;HE Qifu;TANG Cheng;ZHANG Bin;YUE Hua

作者机构：西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 国家民委青藏高原动物疫病防控创新团队成都610041 

基　　金："十三五"国家重点研发计划课题(2016YFD0500907) 国家民委"青藏高原动物疫病防控创新团队"(13TD0057) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2019年第50卷第4期

页      码：893-900页

摘      要：纽布病毒(nebovirus, NeV)是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因(RdRp)序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示:该方法在2.9×10~1～2.9×10~9copies·μL^(-1)之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R^2=0.999 4,扩增效率为98%;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL^(-1);批内和批间的变异系数分别为0.89%～1.89%和0.83%～1.15%;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法(P<0.05)。对2018年8—11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%,场阳性率为100%(15/15)。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。

主 题 词：nebovirus 实时荧光定量RT-PCR 犊牛腹泻 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2019.04.023

馆 藏 号：203660431...