快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价

作     者：张苑怡 武娜 朱宝利 陈蕾 朱玉琢 YuanyiZhang;NaWu;BaoliZhu;LeiChen;YuzhuoZhu

作者机构：吉林大学遗传学教研室长春130021 中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 北京蓝谱生物科技有限公司北京100101 

基　　金：传染病重大专项(No.2009ZX10601) 中国科学院知识创新工程项目(空间科学预先研究项目-21)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2011年第27卷第8期

页      码：1232-1238页

摘      要：基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6拷贝/反应。在特异性实验中,以4株病原菌(肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应。文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值。

主 题 词：NDM-1基因 环介导恒温扩增技术 快速检测 β-内酰胺酶 聚合酶链式反应 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 071010[071010] 081704[081704] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 0836[0836] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.2011.08.014

馆 藏 号：203665113...