短发夹状RNA抑制SMYD3基因在HepG2细胞中的表达

作     者：徐鋆耀 陈立波 徐鋆阳 杨镇 魏海燕 许荣华 XU Jun-yao;CHEN Li-bo;XU Jun-yang;YANG Zhen;WEI Hai-yan;XU Rong-hua

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院综合外科武汉430030 华中科技大学附属协和医院普外科 华中科技大学附属协和医院神经内科 

基　　金：国家自然科学基金 30200273 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2006年第14卷第2期

页      码：105-108页

摘      要：目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。

主 题 词：RNA 癌 肝细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1007-3418.2006.02.007

馆 藏 号：203666166...