一种改良的拟南芥原生质体的制备和转化方法

作     者：史勇 金维环 刘姣姣 王林会 陈彦惠 SHI Yong;JIN Wei-huan;LIU Jiao-jiao;WANG Lin-hui;CHEN Yan-hui

作者机构：河南农业大学农学院河南郑州450046 河南农业大学生命科学学院河南郑州450002 

基　　金：国家自然科学基金项目(31601318) 河南农业大学科研启动金项目 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2019年第29卷第2期

页      码：147-152,170页

摘      要：[目的]为了降低拟南芥原生质体制备的试验成本,缩短制备时间,降低转化所用质粒的浓度和提高转化效率。[方法]实验以胶带法为基础,比较多种普通胶带去除拟南芥叶片下表皮的效果,通过增加裂解叶片用量,设计不同质粒浓度梯度转化原生质体,调整转化过程中PEG处理时间和对原生质体进行暗培养。[结果]发现普通纸质和布质胶带去除拟南芥叶片下表皮效果良好。将叶片酶解时间缩短到20～30 min,转化质粒用量降低到5μg/6～10×104个原生质体;将PEG转化处理时间延长到30 min,利用暗培养降低了原生质体死亡率;用冰水混合物保存原生质体,24 h内不影响转化效率。[结论]改良后的胶带法制备原生质体成本低、用时短、转化效率高、可操作性强。

主 题 词：拟南芥 原生质体 转化 改良 叶肉细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.02.0026

馆 藏 号：203666448...