藏茴香ISSR-PCR反应体系的优化

作     者：田霞 周仙莉 沈宁东 朱惠琴 Tian Xia;Zhou Xianli;Shen Ningdong;Zhu Huiqin

作者机构：青海大学农牧学院西宁810016 

基　　金：国家自然基金项目(31560083) 青海省科技厅基础项目(2018-ZJ-752)共同资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2019年第17卷第8期

页      码：2592-2599页

摘      要：本次试验以藏茴香叶片为试验材料,采用单因子设计和L_(16)(4~5)正交设计试验相结合的方法,对影响藏茴香ISSR-PCR扩增结果的Taq酶、引物、Mg^(2+)、dNTPs和DNA用量进行优化,并在此基础上,筛选出最适的循环次数和退火温度。结果表明正交试验各因素显著性为Mg^(2+)浓度>dNTPs浓度>Taq酶>DNA用量>引物浓度。在25μL的反应体系中,Taq酶1.0 U、引物0.6μmol/L、Mg^(2+)1.5 mmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、DNA 40 ng为最佳用量,最佳退火温度为55℃,最佳循环次数为30。用不同的引物和不同的藏茴香种质对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证,表明确定的优化体系具有稳定性高、重复性好等特性。该反应体系的建立为藏茴香ISSR标记的开发、种质资源的鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。

主 题 词：藏茴香 ISSR-PCR 体系优化 正交设计 单因素试验 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.017.002592

馆 藏 号：203666690...