Dectin-1慢病毒过表达载体的构建与鉴定

作     者：沈林霞 徐红艳 刘栋华 SHEN Linxia;XU Hongyan;LIU Donghua

作者机构：广西医科大学第一附属医院皮肤性病科广西艾滋病防治研究重点实验室广西南宁530021 

基　　金：国家自然科学基金(81760564) 

出 版 物：《中国皮肤性病学杂志》 (The Chinese Journal of Dermatovenereology)

年 卷 期：2019年第33卷第5期

页      码：507-512页

摘      要：目的通过构建Dectin-1慢病毒过表达载体,感染巨噬细胞RAW264.7,建立Dectin-1过表达的巨噬细胞模型。方法根据小鼠Dectin-1基因序列设计引物,经PCR扩增目的基因后克隆至载体pLenti6.3-IRES2-EGFP/V5 DEST(MCS),获得重组质粒pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGF。经和包装质粒Mix共同转染293T细胞,收获慢病毒,利用293T细胞大量扩增慢病毒并进行慢病毒的滴度测定,根据MOI值感染巨噬细胞RAW264.7,经荧光显微镜和荧光定量PCR鉴定感染慢病毒组和感染空病毒组中Dectin-1基因的表达。结果 PCR和测序结果证明已成功构建pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGFP,成功包装慢病毒,计算慢病毒滴度为3.12×10~9 Tu/mL,成功感染巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜下可见绿色荧光,RT-PCR检测到感染重组慢病毒组Dectin-1表达量是感染空病毒组的1 275倍(P<0.01)。结论成功构建Dectin-1基因过表达的巨噬细胞模型,为进一步研究Dectin-1基因在巨噬细胞对抗真菌感染中的作用打下基础。

主 题 词：慢病毒 Dectin-1 真菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 100206[100206] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13735/j.cjdv.1001-7089.201811065

馆 藏 号：203667179...