乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

作     者：张娜娜 刘洋 俞漪 赵渝 窦同海 徐琼 段文锋 翁史昱 ZHANG Nana;LIU Yang;YU Yi;ZHAO Yu;DOU Tonghai;XU Qiong;DUAN Wenfeng;WENG Shiyu

作者机构：上海市质量监督检验技术研究院国家食品质量监督检验中心(上海)上海200233 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 复旦大学生命科学学院上海200438 上海市质量管理科学研究院(上海)上海200050 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(31301486) 上海市自然科学基金项目(13ZR1439600) 国家质量监督检验检疫总局科研项目(2017QK167) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2019年第40卷第8期

页      码：27-32页

摘      要：目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3 pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R^2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11份样品进行检测,其中6份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×10~2～3.68×1~04 CFU/mL之间。结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。

主 题 词：实时荧光定量PCR 嗜酸乳杆菌 定量 检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7506/spkx1002-6630-20180123-301

馆 藏 号：203667528...