PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

作     者：许瑞勤 郭嘉 魏凤灵 冯延 马思续 张留君 李想通 李闻 孙杨杨 杨国宇 夏平安 张改平 XU Rui-qin;GUO Jia;WEI Feng-ling;FENG Yan;MA Si-xu;ZHANG Liu-jun;LI Xiang-tong;LI Wen;SUN Yang-yang;YANG Guo-yu;XIA Ping-an;ZHANG Gai-ping

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 

基　　金：国家自然科学基金重大资助项目(31490600) 国家自然科学基金资助项目(31572520) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第39卷第4期

页      码：609-614,621页

摘      要：参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。

主 题 词：PRRSV GP5 杆状病毒表达系统 真核表达 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.04.01

馆 藏 号：203667714...