敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因互作研究

作     者：张梦瑶 杨峰 刘积凤 刘开东 贺建宁 柳楠 ZHANG Mengyao;YANG Feng;LIU Jifeng;LIU Kaidong;HE Jianning;LIU Nan

作者机构：青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018 青岛畜牧兽医研究所山东青岛266121 

基　　金：国家自然科学基金项目(31402047) 国家绒毛用羊产业技术体系专项资金(CARS-39-05) 青岛农业大学高层次人才科研基金(631410) 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2019年第34卷第2期

页      码：229-238页

摘      要：旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒及共转染成纤维细胞后,通过基因表达量变化研究两基因的互作。以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa5、BMPR1B基因序列信息分别设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMPR1B基因片段,将得到的Hoxa5、BMPR1B基因分别连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-Hoxa5、pEASYTM-T1-BMPR1B重组质粒并转化大肠杆菌(***)DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B重组质粒,转化大肠杆菌(***)DH5α感受态细胞。其次,对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5、BMPR1B基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B构建成功,并且共转染成纤维细胞BMPR1B基因的表达量明显下降,Hoxa5基因的表达量明显升高且共转染组的表达量极显著地高于单转染组(P<0.01)。成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒,并且成功共转染成纤维细胞,Hoxa5基因的表达量明显升高,BMPR1B基因的表达量明显下降,因而Hoxa5基因抑制了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因促进了Hoxa5基因的表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

主 题 词：敖汉细毛羊 成纤维细胞 Hoxa5 BMPR1B 基因互作 质粒构建 RT-PCR Western Blot 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 0905[农学-林学类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.7668/hbnxb.201750743

馆 藏 号：203668500...