pEGFP-BMI-1真核表达载体的构建、鉴定及其表达

作     者：陈凤花 胡丽华 王琳 李一荣 CHEN Feng-Hua;HU Li-Hua;WANG Lin;LI Yi-Rong

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科武汉430022 

基　　金：湖北省科技攻关项目 编号2005AA304B08 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2007年第15卷第5期

页      码：1056-1060页

摘      要：本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达。将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4a mRNA的表达变化。结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达。在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a mRNA的表达为对照组的9.2%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达质粒pEGFPBMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP。这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础。

主 题 词：pEGFP—BMI-1 BMI-1 基因转染 HeLa细胞 P16^INK4a 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 100214[100214] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-2137.2007.05.032

馆 藏 号：203671128...