Red系统三种蛋白在哺乳动物细胞核中定位表达的设计和构建

作     者：张晓楠 黄勇 曹蔚 侯颖 赵玮钦 关璐媛 陈苏民 吴元明 ZHANG Xiao-nan;HUANG Yong;Cao wei;HOU Ying;ZHAO Wei-qin;GUAN Lu-yuan;CHEN Su-min;WU Yuan-ming

作者机构：第四军医大学药理教研室陕西西安710032 西北工业大学生命科学院陕西西安710072 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学病理与生理学教研室陕西西安710032 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.3017522) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2008年第8卷第10期

页      码：1809-1812页

摘      要：目的:构建在哺乳动物细胞核中同时定位表达Red系统三种蛋白的载体。方法:通过给red基因(gam、bet和exo)的3,端分别加入由7个氨基(pro-lys-lys-lys-Arg-Lys-val)组成的核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)和4个甘氨酸构成的linker序列,再从λ噬菌体基因组中,通过PCR技术分别扩增到C端均都带有NLS的gam、bet和exo的DNA全长序列,将三种PCR产物依次克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,得到含3个目的基因(gam-NLS、bet-NLs和exo-NLS)的三顺反子表达载体pCMV-gNIbNIxN,转染培养的哺乳类细胞后,用作者制备并纯化的抗Red3种蛋白的抗体进行间接免疫荧光检测,观察蛋白的定位情况。结果:不带有NLS的Red3种蛋白在细胞中表达主要集中在细胞质很少进入细胞核;而带有NLS的Red3种蛋白于不同时间转染人和鼠的两种细胞后,均表达定位于细胞核中。结论:三顺反子表达载体pCMV-gNIbNIxN的成功构建为进一步探索将λ噬菌体的red系统用于哺乳动物细胞的基因替代打下基础。

主 题 词：Red蛋白 核定位信号 同源重组系统 蛋白质表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2008.10.002

馆 藏 号：203671422...