牙鲆钙调素基因在原核和真核细胞中的表达

作     者：吕爱军 胡秀彩 Lv Ai-Jun;HU Xiu-Cai

作者机构：徐州师范大学生命科学学院江苏徐州221116 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30800847) 江苏省高校自然科学基金资助项目(No.08KJD240002) 江苏省重点学科基金资助项目(No.SYC0703) 徐州师范大学自然科学基金资助项目(No.KY2007042)~~ 

出 版 物：《动物学报》 (ACTA ZOOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2008年第54卷第6期

页      码：1061-1067页

摘      要：设计特异引物,以SMARTcDNA为模板,应用PCR方法扩增牙鲆钙调素基因(Paralichthys olivaceus calmodulin,PoCaM)。计算机辅助分析表明,PoCaM基因编码149个氨基酸的推定蛋白,其分子量为17kD,等电点为3.93,含有4个螺旋-环-螺旋样结构,与其它鱼类CaM氨基酸一致性为97.3%-100%。构建原核表达重组质粒pET32a/PoCaM,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE蛋白电泳,结果显示PoCaM在大肠杆菌中进行了特异性融合表达,融合蛋白分子量约为34kD,与预期分子量大小一致。同时,以绿色荧光蛋白(GFP)为表达标签,构建真核表达重组质粒pEGFP-N3/PoCaM,经Lipofectamine 2000介导转染鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC),荧光显微镜观察显示,PoCaM在EPC细胞中进行瞬时表达,主要分布于细胞核及胞浆中。

主 题 词：牙鲆 钙调素基因 原核表达 真核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

馆 藏 号：203671538...