重组人HIF-1α真核表达质粒的构建和鉴定

作     者：陆蕴松 高忠礼 刘光耀 LU Yun-song;GAO Zhong-li;LIU Guang-yao

作者机构：吉林大学中日联谊医院骨科吉林长春130033 

基　　金：吉林省科技厅科研基金资助课题(20070105) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2009年第35卷第2期

页      码：318-321页

摘      要：目的:构建重组人HIF-lα真核表达质粒,为进行人HIF-lα基因的克隆与表达做准备。方法:从人外周血细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法反转录合成cDNA。分别以含有绿色荧光蛋白(EGFP)片段的质粒PIREGFP质粒和反转录合成的cDNA为模板,加入所设计的3对引物[EGFP-linker、HIF-1α)上游(up)和下游(down)引物]所扩增目的基因片段分别与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB/Amp平板培养基筛选菌落,提取质粒。测序正确后经酶切先后克隆进入pVAX1载体。结果:通过聚合酶链反应(PCR)分别获得约870、1199和672bp的特异性DNA片段,分别与T载体连接后测序,测序结果与GenBank所提供的基因序列相同。将以上3个片段依次连入pVAX1载体后,所得质粒经酶切鉴定后获得约1800bp片段,与预想结果一致。结论:成功构建了重组人HIF-1α真核表达质粒pVAX1-EGFP-linker-HIF-1α。

主 题 词：缺氧诱导因子1 载体 质粒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.2009.02.003

馆 藏 号：203671744...