兽疫链球菌透明质酸分解酶基因的敲除

作     者：崔亚娜 苏旭东 王羽 马晓燕 王雪静 林杨 张伟 CUI Ya-na;SU Xu-dong;WANG Yu;MA Xiao-yan;WANG Xue-jing;LIN Yang;ZHANG Wei

作者机构：河北农业大学食品科技学院保定071001 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2009年第29卷第12期

页      码：94-99页

摘      要：以透明质酸分解酶基因(Hyl)为改造目标,利用同源重组技术获得Hyl基因敲除的重组菌。首先以兽疫链球菌的基因组DNA为模板扩增出部分透明质酸分解酶基因(Hyl-1),然后将其克隆到载体pMD19-T上,再以质粒pUC19为模板,PCR扩增得到氨苄青霉素抗性基因,通过反向PCR将其插入Hyl-1基因的中部,得到基因敲除载体pMD19T-SA。该载体与质粒pBR322分别用EcoRⅠ、PstⅠ双酶切后进行连接,得到基因敲除的重组载体pBR322-SA,PCR及限制性酶切分析,构建的敲除载体与设计结果相符。最后,利用这两种敲除载体通过同源重组技术得到一株重组菌,经PCR及酶活鉴定,这株菌的Hyl基因已缺失。

主 题 词：兽疫链球菌 Hyl基因 反向PCR 基因敲除载体 重组菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20091218

馆 藏 号：203672035...