克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

作     者：易海涛 夏立新 刘芳 闫浩 黄钟 汤慕瑾 陈大玮 刘志刚 YI Hai-tao;XIA Li-xin;LIU Fang;YAN Hao;HUANG Zhong;TANG Mu-jin;CHEN Da-wei;LIU Zhi-gang

作者机构：深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 

基　　金：国家自然科学基金(30871752) 深圳出入境检验检疫局科技计划(SZ2008105) 深圳市深港创新圈项目 深圳大学创新团队基金(200904)资助项目 

出 版 物：《江西师范大学学报（自然科学版）》 (Journal of Jiangxi Normal University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2011年第35卷第3期

页      码：280-285页

摘      要：克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.

主 题 词：克氏原螯虾 原肌球蛋白 变应原 克隆表达 纯化 免疫印迹 酶联免疫吸附测定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-5862.2011.03.016

馆 藏 号：203672718...