靶向Nrf2基因microRNA表达载体构建及初筛

作     者：李煌元 汤章彬 吴思英 林炜 王章敬 

作者机构：福建医科大学公共卫生学院环境与健康研究所职业与环境卫生学系福建福州350004 福建医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系 

基　　金：国家自然科学基金(30800936) 福建省环境与健康重点学科基金(GW-10) 福建省教育厅(JA07084) 

出 版 物：《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期：2011年第27卷第9期

页      码：1116-1118页

摘      要：目的利用真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miR载体构建针对人Nrf2基因的微小RNA（microR-NA）真核表达载体,为研究Nrf2基因在化学物毒作用提供参考依据。方法设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列,构建重组载体并命名为pcDNA-Nrf2-A、pcDNA-Nrf2-B、pcDNA-Nrf2-C、pcDNA-Nrf2-D,转染人乳腺癌MCF-7细胞;通过荧光显微镜观察绿色荧光监测转染效率,转染48 h后用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学检测瞬时转染细胞Nrf2基因mRNA和蛋白的表达变化观察沉默作用来初筛有效的重组载体。结果成功构建miRNA真核表达载体pcDNA-Nrf2;转染效率约为20%~40%;瞬时转染重组质粒48 h后,与空白对照和阴性对照质粒比较,pcDNA-Nrf2-A Nrf2 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）;pcDNA-Nrf2-B、pcDNA-Nrf2-C、pcD-NA-Nrf2-D mRNA表达降低,差异有统计学意义（P〈0.001）,pcDNA-Nrf2-C抑制Nrf2基因mRNA表达强于pcDNA-Nrf2-D（P〈0.05）。结论成功构建了Nrf2的microRNA表达载体pcDNA-Nrf2-C,可作为进一步研究Nrf2基因功能的工具。

主 题 词：Nrf2 微小RNA 真核表达载体 人乳腺癌细胞株MCF-7 

学科分类：100405[100405] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

馆 藏 号：203672723...