miR-186海绵载体的构建及其在***926细胞株中的表达

作     者：王梦旭 李胜男 胡伟东 陈少凤 陈杏兰 李友 WANG Mengxu;LI Shengnan;HU Weidong;CHEN Shaofeng;CHEN Xinglan;LI You

作者机构：广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524002 广东医科大学附属医院神经病学研究所广东湛江524002 

基　　金：国家自然科学基金资助课题(81571157) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2019年第45卷第3期

页      码：498-503,I0002页

摘      要：目的:构建微小RNA-186(miR-186)基因的海绵载体,建立稳定敲减miR-186的***926细胞株。方法:化学合成miR-186海绵体序列,并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine 2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞,包装慢病毒,测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组,FV040-miR-186-sponge作为实验组,分别感染***926细胞,筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中***926细胞miR-186的相对表达水平。结果:测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的***926细胞中观察到绿色荧光蛋白(GFP)的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×108TU·mL^-1,FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×108TU·mL^-1;成功建立了稳定表达miR-186-sponge的***926细胞株,感染效率达95%;qPCR检测,与空白对照组和FV040-control组比较,FV040-miR-186-sponge组***926细胞中miR-186相对表达水平降低(P<0.01)。结论:成功构建了miR-186基因的海绵载体,建立了稳定下调miR-186表达的***926-miR-186-sponge细胞株。

主 题 词：微小RNA-186 海绵体 慢病毒 EA.hy926细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.20190306

馆 藏 号：203673195...