ROCK1基因敲除对乳腺癌细胞系迁移及侵袭的影响

作     者：王晓杰 滕宇 顾勐 王子宇 赵晓婷 岳文涛 WANG Xiaojie;TENG Yu;GU Meng;WANG Ziyu;ZHAO Xiaoting;YUE Wentao

作者机构：首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室北京101149 首都医科大学附属北京妇产医院中心实验室北京100026 

基　　金：北京市医院管理局临床技术创新项目(XMLX201705) 国家自然科学基金(81672838) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2019年第31卷第3期

页      码：193-197,202页

摘      要：目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1 敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:设计并合成靶向ROCK1 的向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR单载体慢病毒上,感染并筛选稳定细胞株,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力。结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的GV392质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ROCK1 敲除的细胞株构建成功;ROCK1 基因敲除后,与对照组细胞相比,其蛋白表达缺失。划痕实验结果显示ROCK1 敲除细胞株24 h划痕愈合度为(60.600±0.047)%,对照组细胞划痕愈合度为(80.404±0.018)%,差异有统计学意义(P=0.003)。Transwell实验结果显示ROCK1 敲除细胞株在24 h的迁移细胞数为(271.3±5.0)个,对照组的迁移细胞数为(448.3±5.5)个;48 h的迁移细胞数在实验组和对照组分别为(1.7±2.9)个和(298.3±5.7)个,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:ROCK1 基因敲除可明显抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力,提示ROCK1 基因在乳腺癌侵袭和转移中可能发挥重要作用。

主 题 词：Rho相关蛋白激酶1 CRISPR/Cas9 迁移 侵袭 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2019.03.004

馆 藏 号：203673251...