表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒的构建

作     者：黄星 宋杰 李嘉祺 郑惠文 李洪哲 李恒 郭磊 刘龙丁 HUANG Xing;SONG Jie;LI Jiaqi;ZHENG Huiwen;LI Hongzhe;LI Heng;GUO Lei;LIU Longding

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650000 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费 中国医学科学院病毒疫苗研发系统研究重点实验室 中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目(项目号:2016-I2M-1-014 ) 题目:重要新发突发传染病生物安全基础与防控技术研究 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2019年第35卷第3期

页      码：446-453页

摘      要：柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段。本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A16-Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CV-A16-CXCL13)。首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5 UTR-CXCL13-VP4-VP2-NdeⅠ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体。将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CXCL13重组病毒。使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13(Chemokine (C-X-C motif) ligand 13,CXCL13)及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到(CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20～30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制。本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考。

主 题 词：柯萨奇病毒A组16型(CV-A16) 趋化因子配体13(CXCL13) 重组病毒 反向遗传学 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 060304[060304] 06[历史学] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0603[0603] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003533

馆 藏 号：203673311...