布鲁氏菌OMP25与OMP31蛋白的表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制

作     者：王海丽 董炳梅 李芬 许崇友 王金良 WANG Hai-li;DONG Bing-mei;LI Fen;XU Chong-you;WANG Jin-liang

作者机构：聊城职业技术学院聊城252000 山东华牧天元农牧股份有限公司济南250101 山东绿都生物科技有限公司滨州256600 日照市东港区动物疫病预防控制中心日照276800 山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600 

基　　金：山东省高等学校科技计划项目(No.J18KB064) 山东省博士后创新项目专项资金资助(No.201703056) 山东省现代农业产业技术体系羊创新团队岗位专家项目(No.SDAIT-10-07)~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2019年第35卷第5期

页      码：404-410页

摘      要：目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质粒pET-OMP25与pET-OMP31,进行酶切鉴定与基因序列测定后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导表达,OMP25与OMP31蛋白主要以包涵体形式存在;将目的蛋白纯化,应用Western blot进行蛋白活性的检测。结果纯化的目的蛋白具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为包被抗原,在确定了OMP25与OMP31蛋白最佳配比为4∶1、抗原最佳包被浓度为10μg/mL、血清的最佳稀释倍数为1∶50倍稀释、临界值为0.314的基础上,建立羊布鲁氏菌病抗体间接ELISA诊断方法并组装成诊断试剂盒,并将试剂盒进行了特异性、敏感性、重复性、符合率试验、血清交叉反应性等检测。结论研制的羊布鲁氏菌病抗体ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,可重复性,可应用于临床样本检测。

主 题 词：布鲁氏菌 OMP25 OMP31 间接ELISA 

学科分类：1007[医学-药学类] 090601[090601] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/ji.ssn.1002-2694.2019.00.050

馆 藏 号：203673311...