弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建

作     者：谢彬彬 章庆伟 陈亲芬 白炳君 林季 刘文权 梁韶晖 XIE Bin-bin;ZHANG Qing-wei;CHEN Qin-fen;BAI Bing-jun;LIN Ji;LIU Wen-quan;LIANG Shao-hui

作者机构：温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室浙江温州325035 

基　　金：浙江省自然科学基金项目(No.Y2100971) 浙江省大学生科技创新活动计划项目(No.2013R413013) 温州医科大学本专科学生科研课题项目(No.wyx201201026) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2014年第9卷第9期

页      码：820-823页

摘      要：目的构建弓形虫RH株微线体蛋白M2AP和MIC2的真核表达载pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为建立同时表达MIC2和M2AP蛋白的重组毕赤酵母表达系统,制备重组粘附蛋白复合体MIC2-M2AP奠定基础。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆转录合成cDNA。根据已知的弓形虫mic2和m2ap基因序列,采用引物设计软件Primer premier5.0自行设计并合成引物,以cDNA为模板,PCR扩增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T载体,经酶切和测序鉴定后回收目的片段,分别插入至pGAPZαA内,构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,转化入*** DH5α。提取转化菌质粒,进行酶切和测序鉴定。结果 PCR扩增得到的mic2和m2ap基因分别为2 200bp和1 000bp,与预期大小一致。T-A克隆重组质粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重组酵母表达质粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap经测序鉴定,与GenBank收录的弓形虫mic2基因和m2ap基因序列同源性为100%,重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap构建成功。结论成功构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为进一步研究MIC2和M2AP相互作用机制及其免疫保护效应奠定了基础。

主 题 词：刚地弓形虫 MIC2 M2AP 真核表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.140913

馆 藏 号：203674376...