人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法

作     者：杜珍武 齐熙明 王茜 吴晓冬 杨绍娟 张桂珍 DU Zhen-wu;QI Xi-min;WANG Qian;WU Xiao-dong;YANG Shao-juan;ZHANG Gui-zhen

作者机构：吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130033 吉林大学药学院基因工程教研室吉林长春130021 河北省秦皇岛市第一医院中心实验室河北秦皇岛066000 

基　　金：吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20050405-7) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2009年第35卷第2期

页      码：309-313页

摘      要：目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人IL-12p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物,其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点,p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点。通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12p35与p40基因片段。利用KpnⅠ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切,酶切产物回收后利用T4DNA连接酶进行连接,应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增。利用KpnⅠ内切酶对连接产物进行酶切鉴定。将扩增的连接产物克隆入T载体,挑选阳性克隆并进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序。结果:通过PCR分别获得约1000bp大小的p40基因片段与600bp大小的p35基因片段,两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1600bp左右的拼接产物,采用KpnI内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1000和600bp大小的基因片段,分别与p40和p35基因片段大小一致。拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1600bp大小的酶切产物,拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致。结论:利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接。建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法,为进一步研究IL-12的生物学功能以及基因治疗提供实验基础。

主 题 词：白细胞介素12 聚合酶链反应 基因拼接 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.2009.02.014

馆 藏 号：203678732...