SYBR Green实时荧光定量聚合酶链反应宽范围检测人GAPDH基因体系的建立

作     者：李喆 张影 徐颖华 辛晓芳 Li Zhe;Zhang Ying;Xu Yinghua;Xin Xiao fang

作者机构：中国食品药品检定研究院/计生委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81471968) 国家科技"重大新药创制"专项课题项目(2013ZX09304101) 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2015年第36卷第22期

页      码：3229-3231页

摘      要：目的建立一种快速、灵敏的人3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法根据GeneBank数据库中提供的人GAPDH基因（NC000012）mRNA序列,在其保守区域设计一对用于RT-PCR引物,通过优化反应体系和反应条件,成功建立了检测人GAPDH基因的SYBR Green RT-PCR方法。结果实验结果表明,该检测方法检测人GAPDH基因的最低检测拷贝数可达到15copies/μL,在一个较宽的浓度范围内（1.5×1011.5×107）具有良好的线性关系（r=0.992）。溶解曲线呈现了清晰的单一峰型,Tm值为（84.5±0.2）℃。结论该研究为人GAPDH基因作为内参基因进行人功能基因与病原基因表达的定量分析提供了一种更为快速、灵敏的方法。

主 题 词：内参基因 3-磷酸甘油醛脱氢酶 荧光定量-聚合酶链反应 灵敏 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2015.22.004

馆 藏 号：203679276...