GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立

作     者：李楚 任雪洋 李琳 厉小雪 金永 张曼玲 刘晓蕊 熊强 张立宁 王盈 李荣凤 杨海元 冯书堂 戴一凡 Li Chu;Ren Xueyang;Li Lin;Li Xiaoxue;Jin Yong;Zhang Manling;Liu Xiaorui;Xiong Qiang;Zhang Lining;Wang Ying;Li Rongfeng;Yang Haiyuan;Feng Shutang;Dai Yifan

作者机构：南京医科大学江苏省异种移植重点实验室江苏南京211166 北京盖兰德生物科技有限公司北京100010 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFC1103701) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2019年第39卷第6期

页      码：835-840页

摘      要：目的:利用CRISPR/Cas9技术建立五指山小型猪近交系GGTA1/β4GalNT2双基因敲除克隆猪。方法:设计合成靶向猪GGTA1和β4GalNT2基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以pX330质粒为骨架,分别构建GGTA1和β4GalNT2的Cas9打靶载体,转染至近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)中,通过G418药物筛选和测序鉴定获得双基因敲除的单细胞克隆,然后利用体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)获得双基因敲除的近交系五指山小型猪,并利用流式细胞技术检测克隆猪外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中αGal和Sd(a)抗原的表达。结果:成功构建GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体,转染后获得双基因敲除的近交系五指山小型猪PFF细胞克隆9个。SCNT成功获得了10只五指山小型猪近交系双基因敲除的克隆猪,其PBMC无αGal和Sd(a)抗原的表达。结论:CRISPR/Cas9技术可以实现对猪GGTA1/β4GalNT2基因的编辑。本实验首次成功制备了GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的近交系五指山型猪,为异种器官移植研究与应用提供了新的供体材料。

主 题 词：近交系五指山小型猪 GGTA1/β4GalNT2 CRISPR/Cas9 异种移植 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20190609

馆 藏 号：203679331...