利用单因子和正交设计双重实验方法优化广藿香ISSR-PCR实验体系

作     者：曹嵩晓 李娟玲 刘国民 王艺 戴景 CAO Song-xiao;LI Juan-ling;LIU Guo-min;WANG Yi;DAI Jin

作者机构：海南大学苦丁茶研究所海南海口570228 

出 版 物：《热带生物学报》 (Journal of Tropical Biology)

年 卷 期：2011年第2卷第1期

页      码：35-41页

摘      要：为了建立广霍香优化的ISSR-PCR反应体系,首先通过单因子试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计的方法,对影响广藿香ISSR-PCR反应的5种因素4水平进行优化试验。结果表明:广藿香ISSR-PCR的优化反应体系最终确定为:在25μL反应体系中,含DNA模板40 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol.L-1,引物浓度为0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量为1.5 U,dNTPs浓度为150μmol.L-1。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,然后按94℃变性45 s,52.7℃退火45 s,72℃延伸90 s,进行40个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存。

主 题 词：广藿香 ISSR-PCR 单因子试验 正交设计 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-7054.2011.01.007

馆 藏 号：203679463...