鸭肠炎病毒gB N端(60～110aa)抗原优势区的原核表达及抗血清的制备

作     者：曹春秋 张树栋 刘琪 董井泉 高明春 张文龙 许丽 于长泳 马波 王君伟 

作者机构：东北农业大学动物医学学院辽宁沈阳110164 东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164 

基　　金：2013年度黑龙江省博士后资助项目(LBH-Z13021) 高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20102325110004) 东北农业大学大学生创新创业训练项目(2013029) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第45卷第9期

页      码：888-895页

摘      要：以本实验室已克隆的鸭肠炎病毒（DEV）C-KCE株ul27基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得编码鸭肠炎病毒gB N端第60～110aa的目的基因片段,大小为150bp。将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中,阳性质粒被命名为pET-32a（＋）-gB-1。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白以包涵体形式表达,大小约为27ku。用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,鸭抗DEV阳性血清经间接ELISA检测证实其具有抗原性,并以此为免疫原免疫家兔制备抗血清,经间接ELISA检测,抗血清效价为1∶25 600。应用间接免疫荧光及Western-blot分析制备的抗血清的反应性,均证实抗血清可特异性识别DEV gB蛋白。分别以重组蛋白和DEV超离病毒为检测抗原进行间接ELISA,检测DEV免疫鸭的抗体消长规律,结果显示两者的抗体变化趋势一致。以上结果表明,制备的抗血清可作为DEV检测的候选试剂,表达的重组蛋白可作为DEV抗体检测的诊断抗原。

主 题 词：鸭肠炎病毒 gB 原核表达 抗血清 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2015.09.002

馆 藏 号：203681463...