荧光标记复合PCR扩增微卫星位点的构建与优化

作     者：朱泽远 WANG Ya-ju 施用晖 乐国伟 ZHU Ze-yuan;WANG Ya-ju;SHI Yong-hui;LE Guo-wei

作者机构：国家食品科学与安全重点实验室无锡214036 新加坡国立大学医学院生理学系新加坡117579 江南大学食品学院无锡214036 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2007年第27卷第11期

页      码：61-65页

摘      要：采用毛细管电泳技术,构建并优化了荧光标记复合PCR同时扩增多个微卫星位点。根据设计所扩增微卫星位点的期望长度,将9个微卫星位点分成两组,5个位点用FAM(蓝色)标记,4个位点用HEX(绿色)标记;两种荧光类型分组优化,用琼脂糖胶电泳检测。荧光标记的复合PCR扩增8个中华绒螯蟹样品的9个微卫星位点,采用ABI3730xl毛细管电泳检测,以ROX500(红色)为长度标准物,结果经Genemapper3.5软件分析,检测结果表明毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物不仅精确读取微卫星位点的长度(分辨率高达1bp),还能区分微卫星位点复制时滑链所引起的"回声斑";调整各微卫星位点引物比例使所有位点扩增强弱均匀。逐一检测复合PCR基本参数(dNTP浓度、PCR程序和模板DNA用量)对复合PCR产物的影响,优化PCR。结果表明通过毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物来读取微卫星位点的基因型具有精确性、高效性和稳定性。

主 题 词：毛细管电泳 复合PCR 微卫星 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20071113

馆 藏 号：203686498...