小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达

作     者：陈锋 何生松 邱荣元 庞然 许娟娟 董继华 Feng Chen;Sheng-Song He;Rong-Yuan Qiu;Ran Pang;Juan-Juan Xu;Ji-Hua Dong

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科湖北省武汉市430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科湖北省武汉市430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室湖北省武汉市430022 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2009年第17卷第14期

页      码：1406-1411页

摘      要：目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.

主 题 词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 RNA干扰 重组表达质粒 短发卡RNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.2009.14.006

馆 藏 号：203687180...