多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计

作     者：张红梅 邵元华 龙甜甜 项艳 王进 汤锋 ZHANG Hong-mei;SHAO Yuan-hua;LONG Tian-tian;XIANG Yan;WANG Jin;TANG Feng

作者机构：安徽农业大学林学与园林学院合肥230036 国际竹藤网络中心北京100102 

基　　金：国家林业公益性行业科研专项(201004055)资助 

出 版 物：《安徽农业大学学报》 (Journal of Anhui Agricultural University)

年 卷 期：2012年第39卷第3期

页      码：412-416页

摘      要：通过对多花黄精ISSR-PCR反应中的Taq酶、buffer(Mg2+)、模板DNA、dNTP以及引物5个关键因素进行了5因素4水平的正交设计试验,确立了适合多花黄精基因组DNA的稳定性强、扩增最多数量谱带的ISSR-PCR最优反应体系,即25μL的反应体系中含有1.0 U Taq DNA聚合酶,3.5 mmol.L-1buffer(Mg2+),80 ng模板DNA,0.08 mmol.L-1dNTP和0.16μmol.L-1引物。采用建立的多花黄精ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验,确定了引物UBC841的最适退火温度为54.8℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行黄精种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了良好的技术基础。

主 题 词：多花黄精 ISSR 正交设计 反应体系 优化 退火温度 

学科分类：1008[医学-中药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13610/j.cnki.1672-352x.2012.03.024

馆 藏 号：203688535...