鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：李庆阳 陈芳艳 刘平 谢永福 冯金牛 况少祥 陈瑞爱 唐秀英 王林川 LI Qing-yang;CHEN Fang-yan;LIU Ping;XIE Yong-fu;FENG Jin-niu;KUANG Shao-xiang;CHEN Rui-ai;TANG Xiu-ying;WANG Lin-chuan

作者机构：华南农业大学兽医学院广东广州510642 华南农业大学动物科学学院广东广州510642 广东省大华农动物保健品股份有限公司广东新兴527400 

基　　金：广东省科技攻关项目(2006A20301001) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2012年第33卷第7期

页      码：18-22页

摘      要：根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。

主 题 词：鸭坦布苏病毒 TaqMan探针 荧光定量RT—PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2012.07.004

馆 藏 号：203688572...