靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响

作     者：周珍珍 邓欢 黄焕军 夏羽佳 涂炜 何嘉怡 田德安 ZHOU Zhenzhen;DENG Huan;HUANG Huanjun;XIA Yujia;TU Wei;HE Jiayi;TIAN Dean

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科湖北武汉430030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81070333) 国家自然科学基金资助项目(81000928) 湖北省自然科学基金(2009CDB177) 

出 版 物：《胃肠病学和肝病学杂志》 (Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology)

年 卷 期：2013年第22卷第6期

页      码：545-548页

摘      要：目的构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响。方法针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变。结果靶向MTDH干扰质粒构建成功。与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTMH1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架。

主 题 词：肝细胞癌 MTDH 骨架重排 小干扰RNA HepG2 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-5709.2013.06.016

馆 藏 号：203688970...