应用CRISPR/Cas9系统敲除PD-1基因对人T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的影响

作     者：龚福生 许扬梅 刘施佳 黄丽洁 郑秋红 GONG Fusheng;XU Yangmei;LIU Shijia;HUANG Lijie;ZHENG Qiuhong

作者机构：福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤生物治疗重点实验室 

基　　金：福建省自然科学基金资助项目(No.2017J01264) 福建省科技计划资助项目(No.2018Y2003)~~ 

出 版 物：《中国肿瘤生物治疗杂志》 (Chinese Journal of Cancer Biotherapy)

年 卷 期：2019年第26卷第6期

页      码：656-661页

摘      要：目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。

主 题 词：CRISPR/Cas9系统 T淋巴细胞 核转染 PD-1 基因敲除 IFN-γ 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3872/j.issn,1007-385x.2019.06.007

馆 藏 号：203689189...