FAK突变体的亚细胞定位及生物学特性

作     者：方旭前 刘湘帆 姚玲 顾志冬 陈长强 倪培华 郑新民 樊绮诗 Fang Xuqian;Liu Xiangfan;Yao Ling;Gu Zhidong;Chen Changqiang;Ni Peihua;Zheng Xinmin;Fan Qishi

作者机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院北院检验科201801 上海交通大学医学院检验系 上海交通大学基础医学院生化与分子生物学教研室 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81071745) 

出 版 物：《中华临床实验室管理电子杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition）)

年 卷 期：2014年第2卷第1期

页      码：32-36页

摘      要：目的探讨外显子33缺失型黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)突变体(FAK-Del33)的亚细胞定位及生物学特性。方法采用基础实验研究设计。将野生型FAK以及突变型FAK-Del33分别构建到pEGFP表达载体,并转染乳腺癌细胞株,以研究分析其细胞表达和定位情况。另构建过表达FAK或FAK-Del33的MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株,研究评价其细胞表达和体外克隆形成能力。结果构建FAK-GFP融合蛋白表达载体转染MDA-MB-468后的细胞定位显示,野生型FAK在胞浆中弥散分布,而FAK突变体蛋白在胞浆中呈点状不均匀分布,并聚集成簇。经限制性内切酶酶切分析与测序分析,成功构建出过表达FAK的慢病毒载体,以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染乳腺癌细胞;经抗生素puromycin筛选和荧光定量PCR鉴定,成功筛选到稳定表达FAK的细胞株。在软琼脂克隆形成实验中,FAK野生型的克隆形成数为(335±48)/1000个,FAK突变体为(735±91)/1000个,后者对MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株的增殖能力高于前者(t=9.437,P<0.01)。结论初步研究表明外显子33缺失可改变FAK的亚细胞定位;并能增强肿瘤细胞株的体外克隆形成能力,这种FAK突变体可能参与肿瘤的发生发展。

主 题 词：剪接突变体 酪氨酸激酶 黏着斑激酶 肿瘤 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2014.01.008

馆 藏 号：203689633...