新型血浆外参照设计及核酸检测分析的研究

作     者：古骄阳 牛凯 余永新 郑林鹏 杨峤 张露萍 孙建国 GU Jiaoyang;NIU Kai;YU Yongxin;ZHENG Linpeng;YANG Qiao;ZHANG Luping;SUN Jianguo

作者机构：陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院全军肿瘤研究所 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金(81602688) 重庆市自然科学基金(CSTC2016jcyjA2013)~~ 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2019年第41卷第13期

页      码：1239-1245页

摘      要：目的设计新型血浆外参照(plasma external reference,PLACON),用于人类血浆mRNA、miRNA的检测分析。方法从低级别物种秀丽隐杆线虫基因组中选取一段保守序列,利用BLAST检索PLACON序列的特异性,设计成为新型血浆外参照。以恶性肿瘤患者血浆样品及癌细胞株上清液,利用实时荧光定量PCR法,在血浆或细胞上清液中分别以PLACON、β-actin、GAPDH、U6为参照,检测血浆mRNA、miRNA和细胞上清液mRNA并进行对比分析。结果 BLAST检索出PLACON序列具有较好的特异性,与人类基因组无交叉性。熔解曲线均显示RT-qPCR反应特异性较高,PLACON在血浆中mRNA水平扩增的循环阈值(cycle threshold,CT)均显著低于GAPDH、β-actin(P<0.01),在血浆中miRNA水平扩增的CT值显著低于U6(P<0.01)。PLACON在癌细胞上清中进行mRNA扩增实验的验证,得到相似的结果。结论 PLACON序列特异性好,在血浆中比内参照更有优势,稳定性更高,扩增效率更高,可用于血浆mRNA、miRNA的定量检测。

主 题 词：外参照 内参照 RT-qPCR 血浆miRNA 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.201812172

馆 藏 号：203689838...