利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系

作     者：卢利莎 白杨 刘鑫 王洪涛 高洁 杨亦青 苏培 刘翠翠 王钰 张磊升 熊涛 周家喜 

作者机构：长江大学生命科学学院荆州434025 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020 河北北方学院医学检验学院张家口075000 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:31171431 31301206)资助的课题 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2015年第37卷第4期

页      码：535-541页

摘      要：CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sg RNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sg RNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。

主 题 词：MEIS2 CRISPR/Cas9系统 基因敲除 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.11844/cjcb.2015.04.0020

馆 藏 号：203689913...