堆型艾美耳球虫ATP酶基因的生物信息学分析及原核表达

作     者：阎晓菲 孔苗 韩红玉 董辉 黄兵 YAN Xiao-fei;KONG Miao;HAN Hong-yu;DONG Hui;HUANG Bing

作者机构：新疆农业大学科学技术学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 

基　　金：国家寄生虫种质资源共享服务平台(平台-TDRC-22) 新疆农业大学科学技术学院大学生科技创新基金项目(2017KCX01) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2019年第27卷第3期

页      码：65-73页

摘      要：为研究堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶(Eimeria acervulina Na+-K+-ATPase,Ea NKA)蛋白的生物学功能,根据Ea NKA基因(GenBank登录号:EU590120.1)设计1对特异性引物,以堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板,对Ea NKA基因进行PCR扩增,将PCR扩增产物克隆入pUCM-T载体并进行测序鉴定,将测序获得的Ea NKA基因编码蛋白进行生物信息学分析。Ea NKA基因全长1157 bp,位于第81-368 bp之间,编码236个氨基酸,分子量约为25 kDa。编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,有12个结构功能域,2个跨膜区,位于多肽N端的7个抗原表位。Blast分析显示其编码蛋白与堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶相关蛋白序列(XP013248919、ACB97673)的同源性为100%。构建重组质粒p ET32a(+)-Ea NKA并进行测序鉴定,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞,进行SDS-PAGE和Western blot表达鉴定。结果显示,构建的重组质粒可在原核细胞中成功表达45 kDa的融合蛋白。本研究成功获得Ea NKA基因的全长序列,并在原核细胞中成功表达,为今后研究该基因的功能及筛选基因工程疫苗候选分子奠定基础。

主 题 词：堆型艾美耳球虫 ATP酶 遗传进化 生物信息学 原核表达 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203691097...